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L'aspect de la spore incluse dans le bacille (endospore) aide à identifier l'espèce. On notera les caractéristiques suivantes: forme, position, déformation du corps végétatif DOCUMENT 3 Gélose à l'amidon - Recherche de l'hydrolyse de l'amidon INTRODUCTION ET OBJET DU TEST Les bactéries qui produisent une amylase sont capables d'hydrolyser l'amidon (incorporé à raison de 1% ( m / V) dans une base de gélose nutritive ordinaire): amidon === amylase ===> maltose TECHNIQUE & LECTURE Ensemencer par une strie longitudinale à la surface du milieu. Validation de méthode de l’identification des Pseudomonas non aeruginosa par. Incuber à la température désirée. Quand la culture est suffisante, la mise en évidence de l'hydrolyse de l'amidon se fait en recouvrant toute la gélose de lugol (eau iodée).

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incuber les boites dans les 15 minutes qui suivent leur ensemencement et jamais au delà de 30 minutes. D'autres précautions doivent être prises, elles ne sont pas toutes présentées ici, vous les trouverez dans l e communiqué du CA-SFM/EUCAST. Distributeur 16 disques d'antibiotiques Dépôt des disques d'antibiotiques Contrôle interne de la qualité Le contrôle interne de la qualité de cette méthode est réalisé avec des souches de collection. Milieux de culture classiques pour la détection d'infections fongiques - Diagnostic Clinique | bioMérieux France. Il s'agit ensuite de consulter le communiqué du CA-SFM/EUCAST et de comparer le diamètre d'inhibition obtenu au diamètre d'inhibition cible et aux limites acceptables. Exemples de résultats d'antibiogramme par la méthode des disques sur gélose Mueller-Hinton et MH-F Antibiogramme sur MH d'une souche d' Escherichia coli BLSE Antibiogramme sur MH d'une souche de Klebsiella oxytoca pénicillinase haut niveau Antibiogramme sur MH d'une souche de Pseudomonas aeruginosa sauvage Antibiogramme sur MH d'une souche de Staphylococcus aureus sauvage Antibiogramme sur MH-F d'une souche de Streptococcus G Antibiogramme sur MH d'une souche de Serratia marcescens

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La gélose Mueller-Hinton est un milieu standardisé recommandé pour l'étude de la sensibilité aux antibiotiques des bactéries peu exigeantes. Milieux de Culture - Diagnostic Clinique | bioMérieux France. Pour les bactéries exigeantes, comme, par exemple, les Streptococcus, les Haemophilus, Neisseria meningitidis, on utilise une gélose MH-F. La gélose MH-F est une gélose MH enrichie avec du sang défibriné de cheval et du β-NAD (facteur V des Haemophilus). Composition gélose Mueller-Hinton (MH) Hydrolysat acide de caséine (peptone) 17, 5 g Extrait de viande 2, 0 g Amidon 1, 5 g Calcium 20 à 25 mg Magnésium 10 à 12, 5 mg Agar 15, 0 g pH = 7, 4 +/- 0, 2 Eau distillée qsp 1 L Composition gélose MH-F Sanf de cheval défibriné 50 mL β-NAD 20 mg La composition de la gélose Mueller-Hinton est standardisée La composition et le conditionnement, des géloses Mueller-Hinton et MH-F, doivent être suffisamment maitrisées pour que les résultats obtenus lors de l'étude de l'activité des antibiotiques soient reproductibles. Ainsi, il est important d'ajuster la concentration finale des cations Ca 2+ et Mg 2+ car elles influent sur l'activité des aminosides sur Pseudomonas aeruginosa et de la tétracycline sur les staphylocoques.

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TOF Le dossier de validation de méthode concerne ici le domaine de la Biologie Médicale, sous-domaine Microbiologie, sous-famille Bactériologie (BACTH). Il s'agit d'une méthode qualitative de portée flexible B (Tableau 26). Tableau 26: Portée d'accréditation pour l'analyse « identification de germes bactériens » Les items à valider pour notre méthode sont: la répétabilité, la fidelité intermédiaire, la variabilité inter-opérateurs, la sensibilité et spécificité analytique, l'incertitude de mesures, la contamination, la robustesse et la stabilité des réactifs et la comparaison de méthodes. 1. Principe de la méthode La méthode est une analyse d'identification de germes bactériens par une technique de spectrométrie de masse de type MALDI-TOF sur colonies bactériennes (voir partie I. 1. 3. Identification par spectrométrie de masse) 2. Souches étudiées Sept souches de référence de la collection de l'institut Pasteur à Paris (CIP) correspondant à des souches ATCC ont été utilisées pour la validation de méthode (Tableau 27).

Concernant la stabilité des réactifs après ouverture, le laboratoire a suivi les recommandations fournisseurs. Les réactifs ont été stockés et utilisés dans le cadre des délais de péremptions en respectant les préconisations du fournisseur (Bruker®) [19]. 8) Comparaison de méthodes La comparaison de méthodes a été réalisée en comparant l'identification par spectrométrie de masse MALDI-TOF avec l'identification par séquençage de fragment de l'ADNr 16S et du gène rpoD en tant que méthode de référence. Pour cela, une collection de souches environnementales et cliniques a été utilisée. L'objectif était de vérifier la corrélation entre les deux méthodes.

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