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Verser dans chaque boite de pétri 100µl de suspension bactérienne d'E. Coli, soit environ 3 gouttes, puis étaler la suspension sur toute la surface de la gélose afin d'obtenir une quantité la plus homogène possible de bactéries à la surface. Laisser sécher la suspension pendant environ 20'. A l'aide d'une pince stérile, prélever un disque antibiotique et le déposer au centre d'une boite de pétri, puis l'appuyer légèrement pour l'enfoncer dans la gélose. Renouveler l'opération pour les 4 antibiotiques, en prenant soin de changer de pinces à chaque nouvel antibiotique. Placer les Antibiogrammes dans une étuve pendant 24h, le temps que la bactérie E. Coli se développe. Observer les résultats. Mesurer les zones d'inhibition VI- Standardisation La fiabilité des résultats d'un antibiogramme est influencée par de nombreux paramètres qui doivent être rigoureusement contrôlés. La standardisation est régie par des documents émanant de l'O. Controle de microbiologie 2éme année biologie santé. M. S. et des divers comités nationaux (pour la France, le Comité de l'Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie).

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Cette standardisation est effectuée par les fabricants et le laboratoire a pour unique responsabilité de stocker les disques dans des conditions optimales et de ne pas utiliser des disques périmés. Avant utilisation, les disques doivent être amenés à température ambiante. Toute cartouche ouverte doit être utilisée dans les cinq jours. La densité de l'inoculum bactérien est un élément primordial et elle doit être ajustée à l'aide d'un photomètre ou par comparaison avec un étalon d'opacité (échelle de McFarland). Une phase de pré-diffusion des antibiotiques peut conduire à l'obtention de zones d'inhibition plus importantes. Selon les pays, une pré-diffusion est ou non préconisée. En France, la technique du "Comité de l'Antibiogramme de la SFM" ne prévoit pas de pré- diffusion La température et la durée d'incubation doivent être fixes. Sujets de partiels et d'examens pour la Licence de biologie - Des sujets de partiels, d'examens pour réviser la biologie enseignée en Licence de biologie.. Pour la majorité des bactéries l'incubation est effectuée à 35-37 °C durant 18-24 heures dans une atmosphère normale La technique doit être régulièrement contrôlée avec des souches de référence

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Des disques pré-imprégnés d'une dose connue d'antibiotique sont déposés à la surface de la gélose. L'antibiotique diffuse à partir du disque en créant un gradient de concentration. Controle de microbiologie 2éme année biologie cellulaire. La détermination du diamètre de la zone d'inhibition permet une estimation de la concentration minimale inhibitrice. Les caractères de sensibilité ou de résistance de la souche bactérienne en seront déduits. IV- Matériel utilisés - Boites de Pétri - Une suspension bactérienne - Désinfectant - Bec Bunsen - Des pinces stériles - Pipettes graduées, pro-pipettes - Râteaux - Disques d'antibiotiques à tester (la pénicilline G, l'ampicilline, Tétracycline, l'Acide Nalidixique) V- Protocole expérimentale Nettoyer la paillasse avec le désinfectant afin de minimiser les risques de contamination extérieur lors de la manipulation. Allumer le bec Bunsen afin de stériliser l'air alentour et détruire ainsi les organismes pouvant altérer les résultats. Toute la manipulation doit se faire dans un rayon de 20/25 cm autour de la flamme.

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Les récipients doivent être suffisamment grands pour ne pas déborder, même pendant l'aspiration des bulles. Il faut prévoir de ne pas les remplir trop. Nous n'avons pas vraiment calculé notre coup, et avons opté pour quatre verres identiques pour un gode de dimensions phalliques moyen-grand, et… Ca a débordé. De quoi mélanger N'ayant rien d'approprié pour touiller, nous avons opté pour des pics à brochettes en bois cassés en deux, plusieurs par verre pour former une tige d'épaisseur suffisante. Sextoy avec imprimante 3d.com. Et ce fut une mauvaise idée. En effet, les pics à brochettes ont perdu de petites échardes de bois, et nous avons galéré pour les ôter du mélange. Nous vous conseillons d'acheter des spatules en bois jetables, style bâtonnets de glace, ou de consacrer définitivement quelques cuillères au bricolage. Une pompe à vide La pompe à vide permettra d'enlever les bulles du silicone, afin que le sextoy n'ait pas de trous. Fabriquer un gode en silicone: choisir le silicone Le silicone à mouler s'achète sous forme de duo de composants à mélanger.