Cytométrie Par Analyse D Image Pdf | Controleur De Gestion Haute Normandie

Fri, 12 Jul 2024 13:40:25 +0000
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CYTOMÉTRIE EN FLUX Dans le chapitre « Adjonction de la cytométrie par analyse d'images »: […] La conception de la cytométrie en flux nécessite une contrainte principale: l'obtention de suspensions monodispersées et la résistance cellulaire à des forces dues à l'entraînement dans un flux laminaire liquide. Les cellules nécessitant leur ancrage à des supports biologiques ou artificiels pour maintenir leur viabilité et préserver leur identité phénotypique n'ont pas suffisamment bénéficié de […] […] Lire la suite

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La cytométrie est l'analyse des caractéristiques (mesures) des cellules soit par l'inspection microscope ou la mesure automatisée des propriétés particulières par un cytomètre. La cytométrie en flux est une technique qui peut fournir des informations quantitatives et qualitatives sur les cellules biologiques et les microparticules. Analyse par cytométrie en flux: Les deux exigences de la cytométrie en flux sont: 1) une seule cellule à la fois peut être présente au point d'analyse, et 2) chaque cellule qui passe doit être éclairée par la même intensité de lumière. Explications: L'information se trouve dans la lumière qui a interagi avec les cellules lorsqu'elles passent l'une après l'autre et une à la fois à travers une région étroite éclairée par un ou plusieurs lasers. La machine qui permet de telles études est un cytomètre en flux, omniprésent dans les laboratoires biomédicaux, cliniques, d'ingénierie et environnementaux. Sa conception comprend la fluidique, l'optique d'éclairage, la photodétection, l'analyse des données et, dans certains modèles, le tri des cellules.

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Principe de l'analyse L'analyse du cycle cellulaire utilise le colorant nucléaire DAPI pour mesurer la teneur en ADN. Le DAPI se lie spécifiquement à l'ADN double brin. Il n'est donc pas nécessaire d'éliminer l'ARN avant de réaliser les mesures de la teneur en ADN. C'est en revanche une étape préalable avec d'autres colorants couramment utilisés pour mesurer les phases du cycle cellulaire, tels que l'iodure de propidium (PI). À l'aide de la microscopie en fluorescence et de l'analyse d'images, la quantification de la teneur en ADN et les mesures des phases du cycle cellulaire sont automatisées. Les préparations d'échantillons peuvent être chargées dans l'un des deux types de lames: NC-Slide A2™ à 2 chambres NC-Slide A8™ à 8 chambres Les échantillons sont analysés à l'aide du cytomètre imageur avancé NucleoCounter ® NC-3000™ où la fluorescence cellulaire est quantifiée par des histogrammes affichant la teneur en ADN. Les marqueurs affichés dans les histogrammes peuvent être utilisés pour identifier les cellules à différents stades du cycle cellulaire.

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La méthode développée de détection de l'autophagie basée sur des images est comparée à la cytométrie en flux standard en comparant les résultats de l'activité de l'autophagie dans les cellules Jurkat affamées de nutriments. Les résultats ont montré une augmentation de l'intensité fluorescente dans les cellules dépourvues de nutriments et une diminution pour les cellules Jurkat récupérées. Cependant, les valeurs d'AAF mesurées de la cytométrie d'image sont considérablement plus élevées que la cytométrie en flux, ce qui pourrait être dû à des différences entre l'instrumentation et les méthodes. Le cytomètre d'image de vision à cellomètre utilise un dispositif à couplage de charge pour la mesure de la fluorescence, tandis que le cytomètre de flux FACS Calibur utilise un tube photo-multiplicateur (PMT). De plus, la méthode d'analyse des intensités fluorescentes différait également entre les deux systèmes. Le cytomètre en flux mesure les signaux de fluorescence totale de chaque cellule, tandis que le système basé sur des images acquiert des images et analyse des autophagosomes colorés par fluorescence à l'intérieur des cellules, ce qui peut fournir des mesures plus précises de l'activité de l'autophagie.

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Le plateau de cytométrie et tri cellulaire de l'Institut Toulousain des Maladies Infectieuses et Inflammatoires est rattaché à la Plateforme technologique des sciences du vivant Toulouse Réseau Imagerie (TRI), labellisée IBiSa. Le plateau, qui est certifié iso 9001 version 2015 et NF X50-900 version 2016, propose un ensemble de ressources et de compétences dédiées au tri cellulaire et à l'analyse par cytométrie en flux et en image. Ce plateau, intégré dans une zone de confinement L2, est équipé de 6 analyseurs, 3 trieurs de cellules et 1 cytomètre en image. Le personnel assure du conseil, de l'assistance, des formations ainsi que de l'enseignement à l'Université Toulouse III. Le personnel du plateau peut également vous accompagner dans la mise au point et le développement de projets de recherche sous forme de collaboration.

Les images de coupes histologiques sont obtenues par des microscopes équipés d'un numériseur. Nos algorithmes d'analyse séparent automatiquement les couleurs des images selon plusieurs méthodes. Voici un exemple sur des images représentant des dommages de type CPD (dimères cyclobutyliques de pyrimidines) induits par des rayons ultraviolets de type B (UVB) dans la peau (laboratoire de Girish Shah). 221 images du derme de la peau d'animaux sont analysées en série par un algorithme systématique. Dans l'épiderme, les noyaux cellulaires sont colorés en bleu et ceux endommagés par les UVB sont colorés en brun. Voici une image obtenue par microscopie en fond clair: Les noyaux entourés en rouge sont endommagés et ceux entourés seulement en vert sont intacts ou très peu endommagés. Ces colorations immunohistochimiques sont adaptées au comptage des cellules mais ne le sont pas en général à la mesure de l'intensité des marqueurs. En effet, la réponse des marqueurs est rarement linéaire avec la concentration de leurs cibles.

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