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Pour de faibles altitudes, jusqu'à 46% de l'émission des dipôles est couplée dans une lame d'indice de réfraction 1, 8 mais cela diminue de plus de 90% pour des altitudes supérieures à 200 nm, − la discrimination du signal de volume vis-à-vis du signal de surface est meilleure dans le cas de la lame de plus fort indice de réfraction. Augmenter le contraste d'indice entre le milieu extérieur et la lame de verre revient donc à réduire le volume de mesure et donc la contribution des signaux de volume. L'utilisation d'une lame de fort indice doit donc permettre: − d'augmenter le signal collecté dans la lame, − d'augmenter la dépendance du couplage de la fluorescence dans la lame de verre suivant l'altitude z µ du dipôle, c'est-à-dire de diminuer la contribution des signaux non spécifiques du Ainsi, la diminution du bruit et l'augmentation du signal spécifique doit permettre d'améliorer significativement le rapport signal sur bruit des mesures et donc la sensibilité du système. L'utilisation de lames de verre ayant un fort indice de réfraction pose cependant plusieurs problèmes: celui de l'approvisionnement des lames et celui de leur coût par rapport à l'utilisation de verres classiques d'indice de réfraction de l'ordre de 1, 5.

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On augmente alors l'intervalle des ondes qui sont propagatives dans le milieu 5 et évanescentes dans le milieu 3 (ondes pour lesquelles k3 < kr < k5, c'est-à-dire 1 < u < n3/n5). Les dipôles ont alors plus de possibilités de se dé-exciter dans ces modes, c'est-à-dire dans la zone sur-critique de la lame de verre. En conclusion, plus l'écart d'indice de réfraction entre le milieu extérieur et la lame de verre est important et plus il sera possible de collecter une part importante de la fluorescence des dipôles dans la lame de verre. Discrimination du signal de volume du signal de surface Regardons l'effet du contraste d'indice de réfraction entre le milieu extérieur et la lame de verre sur le couplage de la fluorescence en fonction de l'altitude du dipôle. Pour cela, nous calculons le spectre d'énergie dissipée dP/du(u) d'un ensemble de dipôles orientés aléatoirement à l'interface d'une lame de verre d'indice de réfraction n5 égal à 1, 5 ou 1, 8 pour différentes altitudes de dipôles. L'intégration de dP/du(u) sur les différents domaines d'émission possibles des dipôles permet alors de déterminer la répartition de l'énergie émise par les dipôles.

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34% 21% 45% Haut Sur-critique Sous-critique 41% 25% 34% Dipôle à l'interface d'une lame de verre d'indice de réfraction n = 1, 8 réfraction n = 1, 51 Figure 3. 14. Calcul de la puissance émise dans le domaine sur-critique et dans les modes propagatifs dans le milieu extérieur (milieu 3) en fonction de l'altitude du dipôle et de l'indice de réfraction de la lame de verre. Le dipôle émet à 580 nm. On remarque que: − l'énergie émise dans les modes propagatifs dans le milieu extérieur (modes pour lesquels 0 ≤ kr ≤ k1) dépend très peu de l'indice de réfraction de la lame de verre. On remarque, néanmoins, que cette énergie oscille en fonction de l'altitude du dipôle. Ces oscillations sont dues aux interférences entre le champ émis directement par le dipôle et celui réfléchi par la lame de verre (Drexhage 1974). Enfin, on observe une baisse de l'énergie émise dans les modes propagatifs pour de faibles altitudes du dipôle. En effet, pour les faibles distances dipôle – lame de verre, les interactions champ proche entre les dipôles et la lame de verre deviennent importantes, ce qui entraîne un couplage de l'énergie des dipôles dans la lame au détriment d'une émission dans les modes propagatifs, − le couplage de la fluorescence dans la lame de verre est fortement dépendant de l'altitude zµ des dipôles par rapport à l'interface.

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